Metody transfekcji w komórkach ssaków są wykorzystywane do wprowadzania lub zmiany materiału genetycznego w komórkach i często są wymagane w większych badaniach eksperymentalnych, takich jak produkcja stabilnej linii komórkowej, badanie regulacji genów, analiza mutacji lub masowa produkcja białka.

Metody transfekcji są zwykle mniej niż 100% skuteczne; typ komórki i typ genu docelowego mogą wpływać na wskaźnik sukcesu. Dlatego ważne jest, aby zmierzyć wydajność transfekcji, która podaje procent komórek eksprymujących transfekowany gen będący przedmiotem zainteresowania w populacji komórek.

Aby umożliwić określenie wydajności transfekcji, gen reporterowy kodujący produkt, który można określić ilościowo, jest często dołączany do docelowego genu będącego przedmiotem zainteresowania. Geny reporterowe to zazwyczaj białka fluorescencyjne, enzymy lub substraty, które można następnie zmierzyć enzymatycznie.

Białka fluorescencyjne są korzystne, ponieważ można je mierzyć w żywych komórkach; podejście to jest zazwyczaj oceniane za pomocą mikroskopii lub analizy FACS dla pojedynczych komórek. Podejścia te, choć skuteczne, są pracochłonne i wymagają kosztownego specjalistycznego sprzętu.

Wielomodowe czytniki mikropłytek z funkcją fluorescencji, luminescencji i absorpcji promieniowania ultrafioletowego (UV), takie jak VANTAstar® firmy BMG LABTECH, mogą stanowić łatwą w użyciu, ekonomiczną alternatywę do pomiaru tych testów.

Wykazano to przez ilościowe określenie znanych stosunków komórek HeLa typu dzikiego (WT) do komórek HeLa wykazujących ekspresję GFP. 20 000 komórek wysiano w różnych proporcjach od 0% (komórki WT Hela) do 100% (komórki GFP Hela). Sygnał GFP mierzono wraz z całkowitą liczbą komórek, stosując Hoechst 33342.

Do wychwytywania fluorescencji zarówno sygnałów GFP, jak i sygnałów Hoechst 33342 zastosowano VANTAstar wykorzystujący skan matrycy 15 x 15 o średnicy 6 mm i wykrywanie odczytu od dołu. Wstępne ustawienia długości fal są dostępne w bibliotece fluoroforów VANTAstar dla wszystkich popularnych białek i barwników. VANTAstar LVF Monochromator™ zapewnia pełną elastyczność pomiaru białek fluorescencyjnych i barwników w zakresie od UV do podczerwieni (IR) przy wiodących w branży granicach czułości.

Sygnał fluorescencji GFP wykazuje liniową zależność od procentu komórek znakowanych GFP, wykazując dokładność r2=0,9997 i precyzję 10,5% CV. Spójny sygnał Hoechst 33342 potwierdza niezawodność posiewu i całkowitą liczbę komórek.

Wielofunkcyjny czytnik mikropłytek, taki jak VANTAstar, stanowi zautomatyzowaną alternatywę dla mikroskopu do wykrywania wydajności transfekcji i innych testów komórkowych. Elastyczna konstrukcja LVF Monochromator™ VANTAstar umożliwia użytkownikom wybór najlepszego podejścia do badania bez konieczności rezygnacji z czułości testu. Oprócz tych testów fluorescencyjnych, użytkownicy mogą również wybrać różne odczyty absorbancji i luminescencji oraz mogą kontrolować środowisko w czytniku mikropłytek, ustawiając temperaturę, wytrząsając i stężenia gazu, aby utrzymać próbki żywych komórek.

Więcej informacji w Internecie