Wirusy związane z adenowirusami (AAV) są wysoce skutecznymi wektorami terapii genowej ze względu na ich nieszkodliwy charakter i zdolność do łatwego zarażania ludzi. W terapii genowej opartej na AAV istnieje kluczowa potrzeba dokładnego i precyzyjnego miana AAV.

Istnieje pilna potrzeba znormalizowanych metod kwantyfikacji dla celów miana AAV. Opracowanie i zastosowanie tych standardowych technik w różnych laboratoriach i systemach produkcyjnych jest głównym wyzwaniem w terapii genowej opartej na AAV.

Co to są AAV i jak są używane?

AAV to grupa wirusów infekujących naczelne i ludzi. Wirusy te są małe, mają średnicę około 20 nm i do replikacji wymagają pomocy innych wirusów.

Niezwykle proste wirusy składające się tylko z otoczki białkowej z ładunkiem jednoniciowego DNA, uzyskują niskie wyniki w skali złożoności wirusów. AAV wywołują niewielką odpowiedź immunologiczną u ludzi, ale nie wiadomo, czy powodują jakąkolwiek chorobę.

AAV są bardzo rozpowszechnione u ludzi, przy czym około 50-80% wykazuje seropozytywność wobec przeciwciał skierowanych przeciwko białkom kapsydu AAV.¹

Ze względu na swoje właściwości serotypy AAV (zwłaszcza AAV2) są znakomitymi kandydatami do terapii genowej. Wykorzystanie AAV w zwalczaniu zaburzeń genetycznych i zapobieganiu chorobom poprzez zastępowanie wadliwych genów zdrowymi stało się głównym przedmiotem badań genetycznych w ostatnich latach.²

Co to jest miano AAV?

AAV szybko stały się jednym z najaktywniej badanych nośników terapii genowej w ciągu ostatnich 20 lat. Naukowcy z powodzeniem zastosowali rekombinowane AAV jako oparte na białkach systemy dostarczania DNA do leczenia kilku chorób genetycznych.

Dokładne miano i charakterystyka AAV są kluczem do opracowania bezpiecznych i skutecznych terapii genowych opartych na AAV.⁵ Potrzeba wydajnej produkcji wektorów AAV i późniejszego przetwarzania została uwydatniona przez komercyjny upadek pierwszego zatwierdzonego przez UE produktu terapii genowej opartego na AAV.⁶

Jeśli dziedzina terapii genowej opartej na AAV i leczenia chorób ma zostać w pełni zrealizowana w najbliższej przyszłości, istnieje pilna potrzeba opracowania znormalizowanych metod, które mogą skutecznie scharakteryzować i określić ilościowo tę klasę wektorów wirusowych.

Wyzwania w mianie AAV

W ostatnich latach opracowano i zastosowano wiele metod w celu poprawy miana genomu i oznaczania ilościowego AAV. Obejmują one test immunoenzymatyczny (ELISA), ilościową reakcję łańcuchową polimerazy (qPCR) i wysokociśnieniową chromatografię cieczową (HPLC).^7,8

Istnieją pewne kluczowe wady tych metod pod względem czasochłonności i braku znormalizowanych metod.⁹

Miano AAV z Gator Bio

Firma Gator Bio opracowała rozwiązanie umożliwiające przezwyciężenie obecnych wyzwań związanych z ilościowym oznaczaniem AAV. Firma opracowała biosensory oparte na przeciwciałach o wysokiej specyficzności do użytku jako sondy AAV.

Rozwiązania technologiczne oferowane przez Gator Bio charakteryzują się dużą dokładnością i szerokim zakresem dynamiki 10⁹-10¹³ VP/ml dla większości serotypów AAV.

Szybsza i bardziej wydajna niż czasochłonne i pracochłonne konwencjonalne techniki, takie jak ELISA, jest bardziej ekonomiczna dzięki tolerancji surowej próbki sondy i możliwości jej ponownego użycia.

Sondy miana AAV firmy Gator Bio nadają się do wieloetapowego wdrażania w opracowywaniu i produkcji terapii genowych opartych na AAV, zapewniając znaczące korzyści naukowcom pracującym w tej dziedzinie.

Skontaktuj się z ekspertami

Gator Bio jest wiodącym w branży producentem systemów i rozwiązań BLI. Aby dowiedzieć się więcej o rozwiązaniach do oznaczania miana AAV firmy Gator Bio, skontaktuj się z ekspertem już dziś.

Referencje i dalsze czytanie

1. Grieger, JC i Samulski, RJ (2005). Wirus związany z adenowirusami jako wektor terapii genowej: rozwój, produkcja i zastosowania kliniczne wektorów. Terapia genowa i systemy dostarczania genów tom. 99 s. 119–145
2. Zinn, E. & Vandenberghe LH (2014) Wirus związany z adenowirusem: nadaje się do służby. Aktualna opinia Virol 8s. 90–97
3. Naso, MF i in. (2017) Wirus związany z adenowirusem (AAV) jako wektor do terapii genowej. Bionarkotyki 31s. 317–334
4. Jak działa terapia genowa?: MedlinePlus Genetics.
5. Dobnik, D. i in. (2019) Dokładna ocena ilościowa i charakterystyka wektorów wirusowych związanych z adenowirusami. Przód. Mikrobiol. 101570
6. Ai, J. i in. (2017) Skalowalna i dokładna metoda ilościowego określania genomów wektorowych rekombinowanych wirusów związanych z adenowirusami w surowym lizacie. Metody terapii genowej człowieka 28s. 139–147
7. D’Costa, S. i in. (2016) Praktyczne wykorzystanie standardów referencyjnych rekombinowanych wektorów AAV: skupienie się na miareczkowaniu genomów wektorowych za pomocą wolnego ITR qPCR. Mol Ther Methods Clin Dev 516019
8. Dorange, F. & Le Bec, C. Podejścia analityczne do charakteryzowania produkcji i oczyszczania wektorów AAV: postępy i wyzwania. Spostrzeżenia dotyczące terapii komórkowej i genowej 4119–129 (2018).
9. Aucoin, MGet al. (2008) Krytyczna ocena aktualnych metod produkcji i kwantyfikacji wektorów wirusowych związanych z adenowirusami. Postępy biotechnologii 26s. 73–88

O Gator Bio, Inc.

Gator Bio to wiodąca na świecie firma zajmująca się bioczujnikami z siedzibą w Palo Alto w Kalifornii. W Gator Bio zapewniamy naukowcom narzędzia i oprzyrządowanie umożliwiające postęp w ich badaniach. Od inżynierii przeciwciał, przez odkrywanie leków małocząsteczkowych, po podstawowe badania, Gator Bio może być używany do nadania znaczenia nieznanemu. Od oryginalnych wynalazców bezznakowej interferometrii biowarstwy (BLI), Gator Bio zapewnia następną generację technologii BLI.

Opublikowano 22 marca 2023 r